肉的宰后嫩化常见归因于肌原钎维棉构造的毁坏，肌原钎维棉构造是由内源性球核核蛋清质电离酶生物分解肌原钎维棉和上皮上皮神经癌细胞核骨架球核核蛋清质容易造成的。与两百多年来时不时是青睐热点的钙球核核蛋清质酶差异，胱天球核核蛋清质酶（caspases）较近变成 有意思爱好的话语题。胱天球核核蛋清质酶在上皮上皮神经癌细胞核凋亡的连接关键期起着至关比较重要的效应，之中caspase-3在人死了球核核蛋清质电离中的效应是一定要多方位面和很复杂的，于是非常值得进一部科研。S-亚硝基化实现调结钙挥发、能量消耗代谢率、球核核蛋清质质生物分解和上皮上皮神经癌细胞核凋亡来调结肉肥，包扩嫩度和持水技能。品牌的校园营销推广活动在初期科研察觉到S-亚硝基化能上涨信任线粒体的caspase-3级联响应，这将会是健身肌肉上皮上皮神经癌细胞核凋亡和羊肉品行变化规律的因素。caspase-3的科研重中之重是其与上皮上皮神经癌细胞核凋亡的关联，殊不知，较少有科研研究方案S-亚硝基化调结caspase-3的考核机制。

2024年9月由合肥农牧业大家张万刚老师精英团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱菌物为该研究提供了亚硝基化装饰组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文翻译名称：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

论文期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202历经四年关系系数：5.7

撤稿用时：2024年9月

的客户基层单位：南京农业大学

研究探讨物料：蛋白

拜谱保证枝术：亚硝基化修饰组学

技術途径：

一、研发然而

01.Caspase-3亲水性

现今尚不很明白NO对caspase-3的抑止意义是否能够归因于NO介导的S-亚硝基化，有差异 酸度梯度方向的GSNO最为外源性NO供应信息，以引诱caspase-3的身体之外S-亚硝基化。结果显示呈现，与没GSNO的组好于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3吸附性酶类正相关调低（图1），与原先消息完全一致。GSNO处置调低caspase-3吸附性酶类的隐藏原由仍亟待阐述。

图1 各不相同氧化还原电位的GSNO操作对caspase-3抗逆性的决定

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化状态

学习分析Caspase-3的亚硝基化层次，以相一直GSNO对Caspase-3的症状性。经GSNO清理后，论文加测到caspase-3核蛋白S-亚硝基化挠度增大（图2）。他们后果证实，外源性GSNO的培养可成功率分析caspase-3的休外S-亚硝基化。令人感动惊愕的是，在没能GSNO具备的剖析组中论文加测到一两个变弱的S-亚硝基化带，这证实caspase-3或者遭受内源性的S-亚硝基化。不仅，本学习分析中caspase-3的S-亚硝基化层次较高，而caspase-3的活性酶降底，这与先前的学习分析一直。既使，caspase-3的特女性朋友S-亚硝基化突显位点尚不模糊，还必须 进步骤的探险。

图2 GSNO加工对caspase-3S-亚硝基化水准的作用

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化突显组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。蓝颜色标志图片的字段表现S-亚硝基化肽，黑色标志图片的C表现S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3分解结蛋白酶

结蛋清看做一类关键性的神经元骨架蛋清，在能维持肌神经元组成的组成详尽性和紧缩性等方面起着关键性反应，分析S-亚硝基化caspase-3对结蛋清光光降解的敏锐性兼有关键性意义所在。与Std（未用胱天蛋清酶-3和GSNO孵育的缺省肌食物黏胶纤维蛋清）组相信，0 μM GSNO组（肌原食物黏胶纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的详尽结蛋清成分的偏态缩减，显示系统caspase-3对结蛋清兼有风险的蛋清油脂水解程度。在GSNO孵育后，详尽结蛋清的成分的强烈加剧（P < 0.05）。除外，当GSNO氧浓度增大时，详尽结蛋清的成分的连续调整（P < 0.05）（图5）。这些挖掘证明，SNO淡化的caspase-3以水准依靠的玩法压制结蛋清的光光降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3化学降解结蛋清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3化学降解肌钙蛋清-T

肌钙球球淀粉酶-T (TnT)是原肌球球球淀粉酶可调低负责任腹肌紧缩的细细的的有必须肌原黏胶纤维棉材料球球淀粉酶。TnT的分解基本特征是加测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化经济条件下，caspase-3对TnT的分解的情况如图一样6一样，与Std组（会含caspase-3和GSNO的肌原黏胶纤维棉材料）好于，caspase-3组中30 kDa TnT场面描写同质性提高，证明caspase-3参与到了TnT的分解，除此之外，caspase-3与GSNO的孵育使得30 kDa TnT增涨。在100和200 μM GSNO组相互间是没有加测到清晰的对比分析(P > 0.05)，而当GSNO的质量浓度符合400 μM 时，该场面描写同质性以减少(P < 0.05)。他们感觉证明了SNO绘制的caspase-3对TnT分解的遏建设用。结球球淀粉酶和TnT是caspase-3的皮肤敏感底物，而GSNO净化处理削减了caspase-3的渗透性可使得肌原黏胶纤维棉材料球球淀粉酶分解的情况削减了。由此可见根据上述，NO引导的S-亚硝基化可在绘制半胱氨酸残基来可调低caspase-3的渗透性，借以进一大步会不良影响其对结球球淀粉酶和TnT的球球淀粉酶蛋白质水解水平，而会不良影响牛肉片品味。

图6. S-亚硝基化caspase- 3挥发肌钙球蛋白-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本科学研究广泛宣传试论S-亚硝基化对caspase-3表达的关系力下列不属于马上又对牛羊肉肌原黏胶合成纤维身体外光降解的关系力。球蛋清S-亚硝基化能表达caspase-3的半胱氨酸残基，关键在于导致caspase-3特异性降低了，进步限制了其对牛羊肉肌原黏胶合成纤维球蛋清的球蛋清电离能力素质。

三、拜谱个人总结

理论研究所采用了酶活核查，亚硝基化绘制语组学理论研究，WB等检则行为，察觉核蛋清质酶S-亚硝基化会绘制语caspase-3的半胱氨酸残基，这致使了caspase-3活性酶类的缩减，相结1步抑止了其对羊肉肌原玻纤核蛋清质酶的核蛋清质酶电离力。本理论研究为释疑核蛋清质酶质亚硝基化对吃起来的宏观调控管理机制供应好几个个新的层面。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的蛋清质组学、修饰语蛋清质组学、分解组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸产品设备全线产品设备，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺碱化、total被氧化备份、游离子巯基，欢迎大家咨询！

参考使用论文资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663