单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于免疫抗体种群特男人、寡核苷酸装饰生产成本昂扬或运营流量冗杂。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯先生项目团队在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低料工费、跨外来物种、全软件平台兼容的全新解决方案。

中文核心期刊简洁

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由在我国科学的探析实验院显性基因基因与成长发育生态学体体学探析方案所和在我国显性基因基因学精举办的國際科研学术研究刊物，秉承于宣传报道我的生态学体科学的探析实验和中医学显性基因基因学教育行业范畴的中国内地散文网性探析方案技术成果。JGG 2028年度作用系数7.1，Scopus科研学术研究刊物评判指标体系CiteScore 9.9，排名第JCR 2028年度GENETICS & HEREDITY教育行业范畴Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY教育行业范畴Q1区，排名第在我国科学的探析实验院学术研究刊物磁盘分区生态学体体学类1区(Top学术研究刊物)，显性基因基因学和生化学与分子结构生态学体体学小类双1区。

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这些是HEATag

精巧的“二一体”设置

HEATag是由凝集素和HUH内切酶分为的就结合核蛋白

「品牌定位器」包块 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化绘制（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「连接方式器」模组 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）目录条状码去共价拼接。

“1+1>2”的结果：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行范例标记符号与追溯。

Fig1: HEATag许多标注机制举手图

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实操检验员

HEATag算是有大多能打？

就能够在有所差异标准下，保持辅乳期生物内部系单内部混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。研发微商团队为 HEATag 设备了多轮 “压差测量”，从神经元系到神经元核，从普通到低温制冷的效果，从新鲜样版到固定位置样版，全位子认证它的平稳性和安全可靠系数。

第一个轮测试方法专门针对喂母乳生物上皮内部系：探讨成员选择了来自于人、鼠、仓鼠五个动物群的每种上皮内部（HEK293T、K562、MEF、CHO），在制冷下使用 HEATag 图标后混和测序。既定回笼的 11447 个上皮内部中，85.66% 都能利用 HEATag 长条码准确性筛选到原动物群，样版间重叠水污染很少，UMAP 聚类算法分折更就直接材料，HEATag 长条码与动物群炎症因子聊天遗传基因组表现形式角度高度。 之后，自测环境进一大步持续：调查者常试在 4℃下标示新鲜松茸度体血细胞系膜膜、在常温下标示甲醇不变体血细胞系膜膜，甚至于随时标示体血细胞系膜膜核。的最终早已优异：因此环境下，模板量标识与植物物种信息查询均兼备挺好的涉及性，拆成准确无误率超 95%。虽然甲醇不变会引发轻的转录本交叉性的污染，体血细胞系膜膜核化学合成会出现一些 RNA 因为流失，体血细胞系膜膜内型的参考文献标注的最终早已与新鲜松茸度模板量做到同样，证实 HEATag 能能标示有所差异外理环境下的调查模板量。

Fig2: HEATag 可在有所差异情况下实现单血细胞转录组混样分析一下

就能箭头喂奶家禽和浮游生物无脊椎神经家禽的原代组织细胞

倘若说人体内部系测试软件是 “基础知识题”，那组建样板即是 “额外题”， 他们样板恰恰舞因人体内部品类冗杂、区域环境满足性唯一性，将成为箭头枝术的 “困惑”，而 HEATag 恰恰舞在他们 “困惑” 上体现出了好处。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸组织性，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞不只是能被确切辨别，因此通常血细胞类行的聚类分析效果都明显可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海洋能生态学的适用性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 长形码与植物物种转录组具较高保持完整性，并没有出显因高盐情况致使的 “标上就失效”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可改变喂乳食草动物组织化样本量多方面 scRNA-seq 具体分析

Fig4: HEATag可做到新鲜的大海无脊椎神经绿色多厚 scRNA-seq 定量分析

HEATag与细胞系的搭配不易引发的转录组的不错变换

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在达到标记符号任务卡的时，不能对下一步的转录酚类化合物析产生电磁干扰，有保障了学习数据信息的真是性。

Fig5: HEATag会影响力样例的 RNA 表明机制

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之后可期

HEATag 能为单肿瘤细胞探究带去那些？

HEATag 的價值，远止不住于 “化解标签原因”，它的具备灵严谨性高性和普遍意义，也正在为单受损细胞研发加载更高能够性

从使用场所去看

HEATag 能包含从 “简单的比讲解”（如癌策划 与顺利策划 、抗癫痫药物办理与相较比较）到 “大总量探析”（如策划 组织组织图谱画出、高通芯片量选择）的全超范围需要量。伴随着 PIP-seq、Stereo-cell 等新型的可扩容的技术的进步，HEATag 还能进一个步骤增加单组织组织探析的通量，保驾护航科研工作拜谱生物大力开展越大总量的工作。

从跨研究方向成长性而言

HEATag 并不是可主要用于转录组学，还能与表观什么是基因组学、血清质组学、办公空间组学等新技术水平加入，也可通过全屋定制字段和寡核苷酸回文序列，HEATag 也可不累加入不一样的的组学步奏，不损害数据捉捕深层次。的同时，应用于HEATag还也可开发单肿瘤细胞糖组学调查新技术水平。

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企业合作动态化

拜谱生物体与陈凯先生已达成基本协作意向性

必玩瞩目的是，在 HEATag 方法表显出惊人软件成长性的背景图片下，拜谱动物施工已与男方深海检测与施工前力检测室（东莞）陈凯教援完成基本合作项目的想法。夫妻双方方案贯穿 HEATag 方法的流通业化着地、科技科学研究转换成等朝向展平的深度协同合作，促进某一成本分析价、跨鱼类的单内部符号方法更迅速软件于实际的科技科学研究景象，为更好地检测室出示高效性、条件的单内部科学研究手段，助推器科技科学研究事业者在内部动物施工学、深海动物施工学、疫情工作机制等这个领域获取更好地冲破